干货分享（送样篇） | 基因组测序送样全攻略，让您的研究更精准！

我们接受多种类型的基因组样品，包括但不限于组织样品，环境样品，DNA，pcr产物，文库。

根据实验需求，我们对样品量有明确要求，请确保您提供的样品量足够进行后续分析。以下是我们不同样品的送样量建议。

1）烧杯倒入50mL生理盐水，解剖活体、选取特定组织，切成0.5cm方形（黄豆粒大小），快速清洗表面血污，滤纸吸干残余水分；

2）放入带螺纹旋盖冻存管中，拧紧盖子（或1.5mL离心管，用锡箔纸包好），放入液氮中速冻，取出后放入自封袋，转移至-80℃冰箱保存；干冰运输。

备注：

①不建议送整块组织，优先小份分装，留好备份。

②次生代谢产物含量极高的动物组织，建议加大送样量。

1）优先选取幼嫩、长势良好、具有群体代表性的植株（植物组织越幼嫩新鲜所含的次生代谢产物就越少），使用纯净水或75%乙醇快速清洗以去除表面泥污等，滤纸吸干残余水分，然后切成0.5cm方形小块（黄豆粒大小）； 

2）放入带螺纹旋盖的冻存管中，拧紧盖子（或用1.5mL离心管，用锡箔纸包好），放入液氮中速冻，取出后放入自封袋，转移至-80℃冰箱保存，干冰运输； 

3）对于多糖多酚的植物样本，建议在采集样本之前，将样本置于黑暗环境24-48小时后再取材。如果需要立即取材，请采集样本后，迅速置于低温保存或运输，减少植物中酚等化合物的氧化对核酸的影响。

备注：

①不建议送整块组织，优先小份分装，留好备份。

②含水量高、表面蜡质层厚，或者次生代谢物含量极高的组织，需加大送样量。

贴壁细胞

1）贴壁细胞培养结束后，观察细胞密度和状态；

2）移液器吸去培养皿中细胞培养基；

3）可用刮棒刮取或胰酶消化，用PBS缓冲液快速洗2次；

4）低速离心除去PBS缓冲液；

5）加入少量PBS缓冲液，吸混后转入冻存管，低速离心后弃尽PBS缓冲液，收集后的细胞要求约5×106个，-80℃冰箱中保存，干冰运输。

悬浮细胞

1）悬浮细胞培养结束后，观察细胞密度和状态；

2）离心去除培养基；

3）收集的细胞用PBS缓冲液快速洗2次；

4）低速离心去除PBS缓冲液；

5）加入少量PBS缓冲液，吸混后转入冻存管，低速离心后弃尽PBS缓冲液，收集后的细胞要求约5×106个，-80℃冰箱中保存，干冰运输。

全血

1）全血样本，建议使用（非肝素钠）EDTA抗凝管采取血液样本，采集后轻微颠倒采集管，使血液与抗凝剂充分混合；

2）血液样本不建议保存时间过长，新鲜血液4℃放置不超过24 h，冻存血液不超过1年；

3）经过速冻后的样本一定要低温保存，避免反复冻融。

血浆血清

1）使用EDTA抗凝管采集新鲜血液至少5mL，轻微颠倒以充分混匀，避免凝固，2-4h内完成血浆分离；

2）将外周血样本在室温条件下1600g离心10min，离心后将上清（血浆）分装到新的离心管中，在吸取血浆过程中注意不能吸到中间白膜层；

3）将第一次分装出来的血浆样本16000g离心10min，结束后将上清转入新离心管中，在吸取过程中不能吸到管底细胞；

4）将分离好的血浆置于-80℃保存，干冰运输。

1）石蜡切片或蜡卷厚度5~10µm，组织区域面积≥10mm×10mm，需5~10片；

2）若为穿刺样本，由于表面积小，建议10片以上；

3）若为石蜡块，厚度需达到40µm；

4）石蜡切片置于切片盒中，蜡卷可放1.5ml离心管中保存；常温运输即可；

5）FFPE样本不宜保存时间过长，建议使用1年内的FFPE样本。

人类粪便样本

1)准备好粪便采集管和无菌勺，清洗双手；

2)在便池铺垫卫生纸，在其上进行排便；

3)用无菌勺挖取粪便内部没有接触空气和地面的部分，挖取2~5g，将挖取的粪便放入采集管中，盖紧盖子；

4)做好标记装入自封袋，-80℃保存，干冰运输。

鼠类粪便样本

实验老鼠饲养在独立通风笼，在指定时间内收集老鼠新鲜粪便（小鼠3~5粒，大鼠2~3粒），立即冻存于-80℃冰箱，干冰运输。

备注：

① 及时记录样品信息（样本名、采集时间），尽量保证同一时间采集（哺乳动物肠道微生物时间节律变化）；

② 尽量避免尿液污染粪便，可以事先排尿，粪便尽可能排入洁净干燥容器内；

③ 如粪便样品量较多或不能马上收集，最迟要在2小时之内全部收集完。

普通土壤样本

1)取样器具事先消毒灭菌（乙醇火烧）处理后方可开始采样，去除表面浮土，挖取地下相应深度（如2~5cm）的土层，去除可见杂质后，土壤过10目筛网；

2) 为了保证取样的合理性，每个样品需从选定的取样范围内选择3个及以上采样点采集并等量混合而成，混匀后分装到无菌离心管中，避免使用密封袋，建议每个样分装5份以上，1~5g/份（极限0.2g），建议送检1~2份，其余自行备份；

3) 置于-20℃短期保存，长期保存请置于-80℃，干冰运输。

作物类根际土壤样本

1) 采集植物植株，去除根部大块土壤；

2) 晃动根部，去除根部松散的土壤后，使用无菌刷子从根部收集残留土壤；

3) 同一样方多点取样土壤样本等量混合均匀后，液氮速冻；

4) 置于-20℃短期保存，长期保存请置于-80℃，干冰运输。

林木类根际土壤样本

1) 采集地面下10~20cm根际土壤；

2) 去除可见杂质及根系后，过2~5 mm孔径无菌筛网；

3) 同一样方多点取样土壤样本等量混合均匀后，液氮速冻；

4）置于-20℃短期保存，长期保存请置于-80℃，干冰运输。

备注：

若为真菌根际土壤，请务必尽可能去除菌丝体残留，减少对DNA提取的干扰。

采样方法：

土壤样本采样为了保证采样的代表性，同时减小误差，一般可根据实际情况按五点取样、多点取样、S形取样、纵向/深度取样等多种方法进行取样。

1) 采集：根据研究目的确定采样深度和范围，采集好的水样需要通过滤膜进行过滤，水样体积较大时需使用过滤泵进行抽滤，建议每个样采集5份以上；

2) 过滤：根据水样的浑浊程度选择相应孔径的滤膜进行过滤，滤膜材质可选择醋酸纤维或聚醚砜滤膜等。清亮水样可直接使用0.22μm（细菌）/0.45μm（真菌）孔径的滤膜，浮游生物可选择0.8~5μm（Piconanoplankton）/5~20μm（微型浮游生物Nanoplankton）/20~180μm（小型浮游生物Microplankton）/180~2000μm（中型浮游生物Mesoplankton）孔径的滤膜，对于浮游生物较多的水体，还可以用3μm的滤膜去掉浮游生物和杂质后再用0.22μm的滤膜收集微生物。过滤水样体积大于100L，或直到滤膜上可见明显覆盖物。浑浊水样过滤前可适当静置分离悬浮粒子或沉淀物，也可以在0.22μm或0.45μm滤膜上放置多层更大孔径的滤膜，如加放一层3~8μm滤膜，以减少堵塞现象，过滤水样体积大于0.5 L（扩增子）或1L（宏基因组）；

3) 运输：将滤膜及沉淀物放入50mL的离心管中，每管1~2片滤膜，液氮速冻，-80℃保存，干冰运输。